生化試劑是指有關(guān)生命科學(xué)研究的生物材料或有機化合物,以及臨床診斷、醫學(xué)研究用的試劑。
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標之一,但不能反映試劑質(zhì)量的全部。試劑成份、純度、用量及穩定性,才是保證試劑質(zhì)量的關(guān)鍵所在。
1 ,試劑空白
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍,試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì);如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會(huì )因含酚類(lèi)物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉肽酶、淀粉酶等檢測試劑會(huì )因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。原則上,吸光度上升的反應,其試劑空白吸光度越低越好,不能超過(guò)一個(gè)高限;相反,吸光度下降的反應,其試劑空白吸光度不能低于一個(gè)低限。
2, 樣品信息
樣品的溶血、脂血、黃疸等會(huì )對測定結果產(chǎn)生非化學(xué)反應的干擾。因此,應根據溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性,采用雙波長(cháng)或多波長(cháng)的檢測模式,并在結果計算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響,減少干擾程度。
3 ,測定范圍
每種待測物都有一個(gè)可測定的濃度或活性范圍,樣品結果若超過(guò)此范圍,分析儀將顯示結果超過(guò)范圍的提示。表示試劑已經(jīng)變質(zhì),應更換合格試劑。
4 ,底物耗盡
使用連續監測法、兩點(diǎn)法測定酶活性時(shí),若酶活性非常高,底物接近被耗盡,吸光度上升或下降會(huì )超過(guò)某一吸光度變化范圍,監測期的吸光度將偏離線(xiàn)性,使測定結果不可靠。
5, 酶的預活化
測定血清中的某些酶,如CK,離體(采血)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過(guò)適當的還原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑,名為N一乙酰半胱氨酸。實(shí)驗研究證明,NAC對血清中已失活的CK活化過(guò)程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時(shí)間較長(cháng)的理論依據。在A(yíng)ST,ALT采用IFCC推薦方法測定時(shí)需要磷酸吡哆醛預活化。需要強調:含有活化劑的生化試劑,其測定酶活性的結果要高些。
6、 校準與結果溯源性
酶的校正:要滿(mǎn)足在同一方法學(xué)、同一測定條件、與理論計算的FACTOR值差異不大,沒(méi)有發(fā)現有明顯影響因素,方可進(jìn)行校正。
7, 試劑抗干擾作用的合理性
有些液體雙試劑,其實(shí)質(zhì)并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩定性問(wèn)題。