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使用Invitrogen轉染試劑需要注意什么?

更新時(shí)間:2022-09-13      點(diǎn)擊次數:834
   Invitrogen轉染試劑在細胞轉染、細胞識別、抗體蛋白研發(fā)等領(lǐng)域廣泛使用,通??梢灾苯淤徺I(mǎi)或者過(guò)實(shí)驗室中DIY配制。Lipofectamine、fugene、磷酸鈣、是較為常見(jiàn)的轉染試劑,其實(shí)目前市場(chǎng)上的轉染試劑盒針對某些轉染進(jìn)行了優(yōu)化,使用起來(lái)較為方便。
  
  由于省掉了電轉杯,轉染過(guò)程也更為簡(jiǎn)化:只需將細胞和核酸吸入Neon移液器吸頭中,再插入到移液器吸頭架上,并按“Start”即可。轉染過(guò)后,直接將細胞加入培養容器中。既沒(méi)有繁瑣的移液,也不需要清洗電轉杯。而且,通用的試劑盒適用于所有細胞類(lèi)型,不用購買(mǎi)多個(gè)試劑盒,也無(wú)需鑒定最佳緩沖液。當然,一次性使用的24K金電極吸頭成本不低。因多次使用會(huì )導致金包被變薄,改變吸頭的電導率,所以每個(gè)吸頭最多只能使用兩次。
  
  使用Invitrogen轉染試劑需要注意什么?
  1、轉染操作時(shí),以細胞融合度達90%-95%為佳;
  2、使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉染效率;
  3、制備轉染復合物時(shí)要求用無(wú)血清培養基稀釋DNA和轉染試劑;
  4、轉染的時(shí)候培養基中不能添加抗生素;
  5、試劑應該在4度保存,要注意避免多次反復長(cháng)時(shí)間開(kāi)蓋;
  6、初次使用應優(yōu)化DNA濃度和陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑量以得到最大的轉染效率。DNA和轉染試劑的比例,通常推薦是1:2-1:3。
  
  轉染后需要進(jìn)行終止嗎?
  不需要。脂質(zhì)體復合物可以穩定存在6個(gè)小時(shí)。如果在進(jìn)行轉染前沒(méi)有進(jìn)行細胞換液,為了保證細胞正常生長(cháng)所需的營(yíng)養,需要在4~6小時(shí)后換用新的培養基。但如果轉染之前已進(jìn)行過(guò)換液,則在脂質(zhì)體轉染后不需要進(jìn)行再次換液。
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