進(jìn)行細胞計數時(shí)要進(jìn)行哪些步驟
更新時(shí)間:2022-09-20 點(diǎn)擊次數:1253
常用的計數方法主要有手工計數(如利用改良牛鮑計數板)和細胞計數儀計數(經(jīng)費充裕組常備)。從原理來(lái)說(shuō),這兩種方法基本類(lèi)似,大致是通過(guò)臺盼蘭或者熒光染料染色后,用肉眼或者用攝像機拍照后進(jìn)行計數,差別就是前者人累,且精準度和穩定性較差;后者不累人,且精準度和穩定性較好。
單細胞測序實(shí)驗的第一步是單細胞懸液的制備,而懸液制備中細胞計數的準確性直接影響單細胞測序的數據質(zhì)量。
1. 計數板
用96%酒精沖洗計數板后,用干凈鹿皮擦凈,另擦凈蓋片一張;把蓋片覆在計數板上面,使之微微移向一側,露出計數板臺面少許,以便滴加細胞懸液;
2. 染色
取吸管1 支,伸入培養瓶中,輕輕反復吹打細胞懸液使細胞重懸均勻后,立即吸細胞懸液少許,向另一離心管中滴入細胞懸液9 滴,再滴入臺盼藍染液1 滴,混勻,置2~3 分種;
3. 加懸液
把計數板平放在顯微鏡臺上,立即從計數板邊緣輕輕滴1~2 滴已染色的細胞懸液,使之充滿(mǎn)計數板和蓋片間空隙中;
4. 鏡檢
鏡下觀(guān)察可見(jiàn)細胞分散各處,健康細胞胞體完整,透明不著(zhù)色,凡著(zhù)色細胞均為不健康者。計算四角大方格內的細胞數;壓中線(xiàn)者只計算左線(xiàn)和上線(xiàn)者,右線(xiàn)和下線(xiàn)不計算在內(即僅計算壓兩個(gè)邊的細胞)。
5. 接種培養
通過(guò)計數測知懸液中細胞數后,可根據實(shí)驗所需細胞數量向培養容器中接種。細胞接種數量隨實(shí)驗目的、血清含量和細胞生物性狀而定;一般接種量在1~10x105細胞/毫升范圍,實(shí)驗周期短,希望細胞增殖較快時(shí),接種量可大些。用含血清量大的培養液培養胚胎來(lái)源細胞、無(wú)限細胞系和惡性細胞系時(shí),細胞接種數量不宜太大。