復(fù)蘇
1.從液氨中取出細(xì)胞凍存管,快速將其置入 37°水浴中解凍直至凍存管中無結(jié)晶,75%的酒精擦拭凍存管外壁:
2.將凍存管中的細(xì)胞移至含 6m 培養(yǎng)基的 15ml 離心管中, 1000rpm 離心 5min;
3.棄上清,沉淀用 6ml培養(yǎng)基重懸,接種 25cm2培養(yǎng)瓶,于 37°C,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
傳代:
(1) 貼壁細(xì)胞:
細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí),棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次。
添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1m 至培養(yǎng)瓶中,倒置微下觀客,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5m 培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,將懸濃移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
棄上清,沉淀細(xì)胞用 1-2m 培養(yǎng)基重懸,按1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代,補(bǔ)加培養(yǎng)基后放入 37,5%C02 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
(2) 懸浮細(xì)胞
待細(xì)胞達(dá)到1x10^6/ml左右可按照以下方法換液培養(yǎng)或傳代
方法1:收集細(xì)胞,1000rpm 離心 5min,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按 1: 2到 1: 3的比例分到合培養(yǎng)基的新中.
方法2:豎立放置培養(yǎng)瓶,細(xì)胞沉淀后棄去上半量培養(yǎng)基,將細(xì)胞懸液按 1: 2 到 1: 3 的比例分到含培養(yǎng)基的新瓶中.
凍存:
1.離心收集細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)(參考離心條件: 1000rpm,5 min)。移去離心管中的上清液
2.加入適量的無血清細(xì)胞凍存液(EK-Bioscience 貨號(hào): S002) 于離心管中,調(diào)整細(xì)胞濃度至1~5x10cells/L。輕柔混,制成細(xì)胞凍存懸液
3將離心管中的細(xì)胞凍存懸液分裝于已標(biāo)示的凍存管中:
4.直接將含細(xì)胞懸液的凍存管放入-80C冰箱,長期冷凍保存或轉(zhuǎn)入液.