X- α -Gal 是一種顯色底物,可用于證明α-半乳糖苷酶活性。 Glycosynth 以具有競爭力的價(jià)格提供高純度 (>98%) 的產(chǎn)品。
酵母雙雜交篩選是一種檢測體內(nèi) 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的基因測定。該方法由 Stan Fields 教授及其同事 (1) 開發(fā),可用于研究兩種已知蛋白質(zhì)的相互作用(例如定義對相互作用至關(guān)重要的結(jié)構(gòu)域或氨基酸)。另一個重要的應(yīng)用是
通過篩選文庫來鑒定以前未知的特定蛋白質(zhì)的結(jié)合配偶體
。
通過激活報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄的能力來選擇陽性克隆,使?fàn)I養(yǎng)缺陷型酵母雙雜交菌株能夠在營養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基上生長。大多數(shù)雙雜交方法還使用大腸桿菌 lacZ基因作為第二個報(bào)告基因。通常,在第二次篩選中,通過耗時的濾膜提升測定法來測定選擇平板上生長的菌落的報(bào)告基因lacZ的激活情況?;蛘?,在產(chǎn)生α-半乳糖苷酶的酵母菌株中,顯色底物 X- a -Gal 可用于測定GAL4-直接基于營養(yǎng)選擇板的兩種雜交相互作用 (2)。
X- a -Gal 是 β-半乳糖苷酶(也稱為蜜二糖酶或 α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶,EC 3.2.1.22)的顯色底物,這種
酶使酵母能夠在生長或發(fā)酵過程中使用二糖蜜二糖作為碳源。在釀酒酵母中,這種 酶由MEL1基因 編碼,該基因受多個 GAL基因的調(diào)節(jié)。該酶響應(yīng)GAL4 激活而分泌,導(dǎo)致 X- a水解- 培養(yǎng)基中的半乳糖導(dǎo)致酵母菌落呈現(xiàn)藍(lán)色。該報(bào)告系統(tǒng)的一大優(yōu)點(diǎn)是它消除了對β-半乳糖苷酶過濾提升測定的需要,并且結(jié)果可以立即在選擇板上看到。