定量蛋白質印跡使不同治療之間的相對比較成為可能。定量蛋白質印跡的目標是準確測量蛋白質表達的變化。
蛋白質-蛋白質相互作用
信號通路
翻譯后修飾
細胞表面蛋白
RNAi分析
改變生活的療法。農作物產量增加。我們所有人都希望通過我們一生的工作做出改變。定量西部片可以成為推進發(fā)現(xiàn)并使世界變得更美好的強大工具。
信號與加載的蛋白質量成正比。
感興趣的蛋白質(或“目標")在檢測的線性范圍內進行定量。
內部上樣控制可糾正樣品制備、上樣和轉移過程中不可避免的變化。
除了這些要求外,實驗變異性還應保持較低,以便可實現(xiàn)復制。
對于定量分析,您必須驗證幾個條件。條帶強度的差異可能是由實驗變異性(如使用不同的抗體或阻斷劑)或真正的生物學變化引起的。在設計實驗之前,確定蛋白質印跡過程中變異的來源以及如何最好地控制它們非常重要。
您的結論將始終基于(并受到)實驗中的變異量的影響。您可以使用 CV(變異系數(shù))、σ(標準差)、r 2(決定系數(shù))或其他全方式來定義或測量變異性。減少變異性是最大限度提高精度的關鍵。
確定實驗結果的重要性是定量西方學者普遍關心的問題。一種方法是定義已處理和未處理樣本之間頻帶信號的百分比變化。實驗變化需要大于您對變異性的測量,例如 CV。因此,為了對微小的變化更有信心,請降低實驗中的 CV。說起來容易做起來難,對吧?為了始終如一地獲得準確的答案,請盡可能消除錯誤源。