提取 DNA 后,大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的下一階段需要已知濃度作為輸入材料。測(cè)量DNA濃度的方法有很多,如紫外吸收法、熒光染料法、電泳法等。
DNA 分光光度計(jì)通常用于測(cè)量濃度,本文將概述它們的工作原理以及使用原因。
分光光度法是一種重要的方法,用于一系列生化實(shí)驗(yàn),包括 DNA、RNA 和蛋白質(zhì)定量和質(zhì)量控制。在這些應(yīng)用中,通常僅提供少量樣品,并且優(yōu)選進(jìn)行無(wú)損分析。使用微體積分光光度計(jì)(有時(shí)稱為納體積分光光度計(jì)或納滴分光光度計(jì))可最大限度地減少定量樣品的使用,通常僅需要 1 µL 樣品。
分光光度法是電磁光譜法的一種形式,涉及材料的透射或反射特性隨波長(zhǎng)的變化的定量測(cè)量。DNA 分光光度計(jì)使用檢測(cè)器記錄一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的光束強(qiáng)度。
DNA 分光光度計(jì)經(jīng)常用于檢測(cè)紫外線、紅外線和可見光輻射,但它們也可以檢測(cè)電磁波譜的許多其他元素。波長(zhǎng)范圍(可以透過(guò)測(cè)試樣本的顏色)是 DNA 光譜儀的一個(gè)重要特征。此外,樣品透射率百分比、樣品吸收率的對(duì)數(shù)范圍以及有時(shí)反射率測(cè)量的百分比對(duì)于某些應(yīng)用來(lái)說(shuō)是重要的特征。
在溶液中,DNA 分光光度計(jì)可以測(cè)量堿基吸收的紫外線水平。DNA 和其他核酸吸收峰值波長(zhǎng)為 260nm 的光。吸收的光量與樣品中 DNA 的濃度成正比。使用比爾-朗伯方程根據(jù)透射光量計(jì)算濃度。要使用分光光度計(jì)定量 DNA,應(yīng)將 DNA 懸浮在溶劑中,并用溶劑對(duì)分光光度計(jì)進(jìn)行空白以校正任何背景吸光度。
分光光度計(jì)是極其精確、準(zhǔn)確和復(fù)雜的設(shè)備,可以用作實(shí)驗(yàn)室的臺(tái)式或模型,也可以便攜式用于現(xiàn)場(chǎng)工作。
DeNovix 的 DS-11 系列在分光光度測(cè)定領(lǐng)域提供了革命性的性能。它結(jié)構(gòu)緊湊且易于使用,能夠提供具有熒光功能的全光譜紫外-可見分析,這意味著它非常適合快速核酸和蛋白質(zhì)定量。