為還原貼壁細胞(例如上皮細胞)表型的天然環(huán)境,通常會(huì )將它們接種到經(jīng)組織培養物處理的表面上,并在此附著(zhù)存活和增殖。 如需進(jìn)行增殖、計數和下游分析,必須解離貼壁細胞和來(lái)自實(shí)體組織的細胞,形成懸浮液。 單細胞懸液是細胞計數、傳代培養再接種和細胞測定/分析必需成分。
解離試劑包括天然存在的酶、較為溫和的非酶替代物;也可通過(guò)螯合鈣防止鈣粘蛋白的附著(zhù)而實(shí)現解離,從而將細胞與表面或相互脫離。細胞解離試劑可能對細胞外基質(zhì)(ECM)底物具有特異性。
我們全面的細胞解離試劑產(chǎn)品線(xiàn)包括:
胰蛋白酶:用于常規細胞分離的動(dòng)物來(lái)源、重組型和StableCell 胰蛋白酶
胰蛋白酶-EDTA和EDTA溶液
ECM特異性膠原酶、彈性蛋白酶、分散酶
Accumax和Accutase非酶溶液
胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶,是常用的貼壁細胞系和組織解離酶之一。粗制胰蛋白酶制劑通常同時(shí)適用上述兩種應用,但胰蛋白酶濃度過(guò)高或細胞孵育時(shí)間過(guò)長(cháng)時(shí),可能會(huì )損傷細胞膜并殺死細胞。從培養基質(zhì)上解離培養細胞的常用方法是聯(lián)合使用胰蛋白酶和EDTA(乙二胺四乙酸)處理,其中胰蛋白酶濃度范圍為0.025%至0.5%。
和標準胰蛋白酶溶液一樣,StableCell 胰蛋白酶溶液專(zhuān)用于細胞解離,但無(wú)需分液、冷凍和解凍。由于不再需要分液及等待胰蛋白酶解凍,此溶液為細胞傳代或相關(guān)實(shí)驗節省了大量時(shí)間,也騰出了更多寶貴的實(shí)驗室冷柜空間。建議2-8 °C儲存我們的StableCell™胰蛋白酶溶液,但我們自己開(kāi)展的研究證明,37 °C儲存的StableCell™胰蛋白酶仍可保留>90%的活性和性能。
膠原蛋白酶可切割天然三螺旋膠原蛋白中的肽鍵。由于具有水解天然膠原蛋白的能力,其廣泛用于動(dòng)物組織細胞分離。膠原蛋白酶存在于多種微生物和不同的動(dòng)物細胞中。膠原蛋白酶是由厭氧細菌溶組織梭狀芽孢桿菌分泌的“粗制"膠原酶。
分散酶是一種快速、有效、溫和且中性的蛋白酶,可培養物中的完整上皮薄層與基質(zhì)的。分散酶I用于消化肺組織和處理細胞,適用于流式染色和鼠CD4 T細胞的分離。
針對需要更為溫和酶活性的細胞和組織,可采用濃度更低、效率更高的Accumax和Accutase酶溶液酶溶液解離或分離。上述溶液:
可有效分離胚胎和神經(jīng)干細胞
解離溫和,可保留細胞活力并增加細胞產(chǎn)量
無(wú)需中和
微信掃一掃