儲(chǔ)存
凍干肽應(yīng)儲(chǔ)存在陰涼、避光、干燥的地方。為了獲得最佳保存效果,請將肽儲(chǔ)存在 -20°C 或更低的溫度下,并遠(yuǎn)離強(qiáng)光。大多數(shù)在此溫度下儲(chǔ)存的肽將保持穩(wěn)定數(shù)年。
吸收水分會(huì)大大降低肽的穩(wěn)定性,并可能降低總肽含量。含有肽的小瓶在打開之前應(yīng)先升溫至室溫。這將減少固體肽的冷表面或容器內(nèi)部從空氣中吸收水分。取出所需數(shù)量后,應(yīng)盡快重新密封小瓶,最好在干燥氮?dú)鈿夥障?,然后將其放回冷藏室?/span>
溶液中含有 Met、Cys 或 Trp 殘基的肽的保質(zhì)期因氧化而受到限制。為了避免重復(fù)凍融循環(huán),建議將儲(chǔ)備溶液分成等份。如果絕對無法避免在溶液中儲(chǔ)存肽,請使用 pH 5-6 的無菌緩沖液,并在 -20°C 下儲(chǔ)存等分試樣,以延長溶液中肽的儲(chǔ)存期限。溶解度肽的溶解度取決于序列。溶解肽可能很困難,特別是當(dāng)肽非常疏水時(shí)。一般來說,嘗試將肽溶解在無菌蒸餾水中。如果肽仍然不溶,請嘗試以下步驟:
超聲處理可能會(huì)有所幫助,因?yàn)樗梢蕴岣呷芙馑俣取?/span>
堿性肽添加10%乙酸或0.1% TFA;對于酸性肽,使用 1% 氫氧化銨或 10% 碳酸氫銨進(jìn)一步超聲處理可提高溶解度。
對于仍然不溶的肽,添加有機(jī)溶劑,例如乙腈、DMSO 或 DMF,濃度高達(dá) 20% (v/v)。請注意,這些溶劑可能會(huì)干擾某些生物測定。對于具有二級(jí)結(jié)構(gòu)的肽,可能需要添加離液劑,例如尿素或鹽酸胍。