Worthington酶類(lèi)主要是膠原酶類(lèi),胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,彈性蛋白酶,和脫氧核糖核酸酶。其溫和的蛋白水解作用使該酶特別適用于制備原代細胞和次級(亞培養)細胞培養,因為它對細胞膜溫和。這種蛋白酶也用作細胞分離和組織分離應用中的二級酶,通常與膠原酶一起使用。
酶的特異性:
酶的特性之一使它們作為診斷和研究工具如此重要,是它們相對于它們催化的反應表現出的特異性。一些酶表現出的特異性;也就是說(shuō),它們只會(huì )催化一種特定的反應。其他酶將特異于特定類(lèi)型的化學(xué)鍵或官能團。
一般來(lái)說(shuō),有四種不同類(lèi)型的特異性:
1、特異性——酶只催化一種反應。
2、組特異性——酶只作用于具有特定官能團的分子,如氨基、磷酸鹽和甲基。
3、連接特異性——無(wú)論分子結構的其余部分如何,酶都會(huì )作用于特定類(lèi)型的化學(xué)鍵。
4、立體化學(xué)特異性-酶將作用于特定的空間或光學(xué)異構體。
Worthington酶類(lèi)已經(jīng)建立了幾種類(lèi)型的粗膠原酶:類(lèi)型1、2、3和4。
1型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
2型含有較高相對水平的蛋白酶活性,尤其是梭菌蛋白酶。
3型含有Z低水平的二級蛋白酶。
4型被設計成胰蛋白酶活性特別低,以限制對膜蛋白和受體的損害。
Worthington膠原蛋白酶用途:
通常用于分離皮膚表皮和真皮層,留下完整的上皮層和干細胞、肝細胞和其他細胞分離應用。然而,由于所涉及的變量的多樣性,應根據經(jīng)驗確定每個(gè)細胞/組織應用的確切隔離條件。
粗膠原酶廣泛用于酶促原代細胞分離和組織解離程序。大多數研究人員要么使用粗制膠原酶制劑,例如 1、2、3 和 4 型,要么使用色譜純化的膠原酶;后者通常與二級酶如彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等結合。為了獲得最佳結果,必須針對要解離的組織調整蛋白水解活性的較精確混合。不同組織的類(lèi)型和有效性之間的相關(guān)性很好,但并不完mei,并且可能部分取決于使用參數和目標以及批次間的差異。