| 品牌 | murongbio/牧榮生 | 供貨周期 | 一周 |
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| 應用領(lǐng)域 | 醫療衛生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥,綜合 | | |
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人低氧誘導因子-1α ELISA 試劑盒
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
中文名稱(chēng)：人低氧誘導因子-1α（HIF-1α）酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）
英文名稱(chēng)： Human hypoxia-inducible factor 1α（HIF-1α） ELISA KIT
【包裝規格】
48人份/盒，96人份/盒
【預期用途】
定量檢測血清、血漿、細胞培養上清和組織等樣本中的人低氧誘導因子-1α （HIF-1α）濃度。
1. 檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被抗人低氧誘導因子-1α
（HIF-1α）抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入人低氧誘導因子-1α （HIF-1α）標準品和
待測樣本，再加入另一株HRP標記的抗人低氧誘導因子-1α （HIF-1α）抗體（HRP標記抗體），
經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-HRP標記抗體的
夾心復合物。加入顯色底物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用
下，最終轉化為黃色。在酶標儀450nm波長(cháng)上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中
人低氧誘導因子-1α （HIF-1α）的濃度正相關(guān)。擬合標準品曲線(xiàn)，可以計算出樣本中人低氧誘
導因子-1α （HIF-1α）的濃度。
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2. 試劑盒檢測的局限
1）僅供科研使用，不得用于臨床診斷
2）請在本試劑盒標示的有效期內使用。
3）試劑盒的試劑不能與其他批號的試劑或其他來(lái)源的試劑混合使用。
4）任何操作人員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、孵育溫度、試劑盒保存時(shí)間的改變，都將影響結合反
應。
5）本試劑盒在設計上去除或降低了生物學(xué)樣本中的一些內源性干擾因素，并非所有可能的影響因
素都已經(jīng)去除。
1. 試劑盒提供的材料
備注：
1）標準品濃度依次為：64、 32、 16、 8、 4、 2 pg/mL。
2）經(jīng)過(guò)大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實(shí)驗過(guò)程中直接取
50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過(guò)最大標準品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標本進(jìn)行適當稀
釋后再進(jìn)行實(shí)驗。
3）盒子拆封后必須在一個(gè)月內使用完；試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染；相關(guān)試劑在
分裝時(shí)會(huì )比標簽上標明的體積稍多一些，具體含量以實(shí)際收到的實(shí)物為主。3
2. 未提供的材料設備
1）能夠檢測 450 nm 吸光度的酶標儀
2）移液器及槍頭、加樣槽
3）3.37℃恒溫箱或水浴鍋
4）準備試劑用的試管、離心管、量筒等
5）蒸餾水或去離子水
6）渦旋振蕩器、微孔板振蕩器
3.貯存
試劑盒保存于 2 - 8℃，有效期標注于標簽上（有效期一般是6個(gè)月）。只有恰當保存的試
劑才是有保證的。如果試劑盒的組分需要再次使用， 請確保上一次使用之后沒(méi)有被污染。
未開(kāi)封試劑盒
貯存于 2 - 8℃。
請在有效期內使用。
打開(kāi)的
試劑盒
或重組
試劑
顯色底物A
顯色底物B
終止液
20×洗液
樣本稀釋液
在 2 - 8℃，
大約可以貯存 3個(gè)月。
標準品
HRP 標記抗體
在 2 - 8℃，大約可貯存 14天。
使用后丟棄。
預包被酶標板
未使用的板條請放回鋁箔袋，封好封
口。在 2 - 8℃，大約可貯存 1 4天。
4.注意事項
1）所有的化學(xué)試劑理應被認為具有潛在危害。
2）推薦只有經(jīng)過(guò)良好實(shí)驗室培訓的工作人員方可操作本試劑盒。操作時(shí)請佩戴合適的防護設
施，例如白大衣、乳膠手套、安全眼鏡等。3）請避免試劑接觸皮膚和眼睛。如不慎接觸，請立即用大量清水清洗。
4）試劑盒中的終止液為酸性溶液，在使用終止液時(shí)，請佩戴防護服，及防護眼睛、手及面部的設
施。
5）本試劑盒用于科學(xué)研究，不能用于診斷治療。
6）請不要使用過(guò)期的試劑。
7)在試劑盒的貯存或孵育過(guò)程請避免強光照射。
8)在操作試劑盒或處理樣本時(shí)請佩戴乳膠或一次性手套。
9)為了避免微生物的污染，以及試劑與樣本間的交叉污染，請使用一次性槍頭。
10)使用干凈的容器配制試劑。
11)試劑的準備必須使用蒸餾水或去離子水。
12)顯色底物在使用之前必須平衡至室溫。
13)液體廢棄物的處理。不含酸的液體廢棄物，加入 1.0 %的次氯酸鈉，浸泡 30 分鐘。含酸的
液體廢棄物，請先中和， 再加入次氯酸鈉。
5.技術(shù)要點(diǎn)
1)加校準品與樣本時(shí)，每個(gè)校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣，避
免交叉污染。
2)在應用自動(dòng)洗板機時(shí)，加入洗液之后，設置 30 秒的浸泡程序，或者在不同的洗滌步驟將微
孔板掉轉 180 度，這樣可以提高分析的準確度。
3)為保證結果的精確性，孵育時(shí)封好封板膜。
4)顯色底物在添加之前應是無(wú)色的。保持顯色底物始終處于避光態(tài)。
5)終止液的添加順序應與顯色底物的添加順序相同。
6)添加終止液之后，底物的顏色應由藍色轉變?yōu)辄S色。如果底物呈現綠色，說(shuō)明終止液與顯色底
物沒(méi)有充分混勻。
7）在任何情況下，避免接觸微孔板的內表面。
8）實(shí)驗中，用剩的板條，應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
三、檢測準備與步驟
1.樣本采集與貯存
細胞培養上清
2000 × g條件下離心20m分鐘，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反
4復凍融。
血清樣本
離心管收集血清。血樣凝集 30 分鐘后，2000 × g 離心 10 分鐘。吸取血清樣本之后即刻
檢測，或者分裝，-20℃以下貯存，避免反復凍融。
血漿樣本
EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。2000 × g 離心 20 分鐘收集樣本。即刻檢測，
或者分裝，-20℃以下貯存，避免反復凍融。
組織樣本
用預冷的PBS (0.01 M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組
織與對應體積的PBS(一般按1: 9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9 mL的PBS，具體體積可
根據實(shí)驗需要適當調整，并做好記錄。推 薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在
冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細胞，可以對勻 漿液進(jìn)行超聲破碎或反復凍融。最后將勻
漿液5000×g離心 5-10分鐘，取上清檢測。
細胞提取液樣本
貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰蛋BAI酶消化，1000×g離心5分鐘后收集細胞；懸浮
細 胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS 洗滌3次。每 1×106 個(gè)細胞中加入150-200μL
PBS重懸并通過(guò)反 復凍融使細胞破碎(若含量很低可減少PBS的體積)。將提取液于1500×g離心
10分鐘，取上清檢測。
注意：1）避免樣本的反復凍融，在檢測前，冷凍樣本應緩慢地恢復至室溫，輕柔混勻。
2）本試劑盒可能適用于其它生物學(xué)樣本，但是未充分驗證。
2.試劑準備
1）用前，所有的組分都要至少復溫30min，確保充分復溫到室溫。
2）濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會(huì )有結晶產(chǎn)生，這屬于正?，F象，水浴加熱使結
晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋?zhuān)?份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。
3.檢測步驟
51）試劑、樣本平衡：檢測之前請將所有的試劑、樣本平衡至室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品，建議
做復孔。
配置工作液：按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
2）加標準品、樣本：設置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL，
樣本孔加待測樣本50μL，空白孔不加。
3）加 HRP標記抗體：除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過(guò)氧化物酶標記的檢測抗體
100μL。
4）孵育：使用封板膜封板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。
5）洗滌：棄掉液體，每孔加入300μL洗液洗板，靜置20s，洗滌5次。每次洗板，在吸水紙上拍
干。為獲得理想的實(shí)驗性能，必須*移除殘留液體。
6）加底物顯色：每孔加入50μL顯色底物A、B 各50μL，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育15分鐘。
7）加終止液：每孔加入50μL終止液。顏色由藍色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現綠色或者顏色的變化
明顯不均勻，請輕輕叩擊板框，充分混勻。
8）檢測讀數：在 15分鐘之內，使用450nm酶標儀進(jìn)行檢測讀數。
4.廢物處理
所有使用或未使用的試劑，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品
的處理程序，每個(gè)實(shí)驗室都有責任根據其實(shí)驗的類(lèi)型和危險性級別，進(jìn)行廢物和污物的處理，
同時(shí)要嚴格依照有關(guān)規定對待所有的廢物和污物。
四、分析
1.結果計算
1）復孔的值通常在20%的差異范圍內結果才有效，復孔平均值可作為測量值。
2）每個(gè)標準品或樣品的吸光度值應減去本底校正孔的吸光度值(如果沒(méi)有做校正孔，則不需要減
去)。
3）檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應的吸光度（OD值）作為橫坐標，利用計算機軟
件，采用多項式曲線(xiàn)擬合，創(chuàng )建標準曲線(xiàn)方程，通過(guò)樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的
濃度值。
4）如果樣品被稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數，才是樣品的最終濃度。
（示意圖，僅供參考）
2.試劑盒的性能
1）物理性能
試劑盒的各液體組分應澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無(wú)破損漏氣。
2)劑量反應曲線(xiàn)線(xiàn)性
標準品劑量反應曲線(xiàn)相關(guān)系數r值，大于等于0.99。
3)精密度
批內精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內精度評估。批內變異系
數CV%小于8%。
批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內精度評估。批間變異系
數CV%小于12%。
4）檢測范圍
2 pg/mL – 64 pg/mL
5)靈敏度
可檢測濃度為0.1 pg/mL。
6)特異性
本試劑盒識別天然和重組人低氧誘導因子-1α（HIF-1α）。
7)穩定性
2℃-8℃保存，有效期6個(gè)月。說(shuō)明
由于現有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒
定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。
1. 最終的實(shí)驗結果與試劑的有效性、實(shí)驗者的相關(guān)操作以及當時(shí)的實(shí)驗環(huán)境密切相關(guān)，請務(wù)必準
備充足的標本備份。
2. 不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì )有少許差別，如：檢測限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請依據試劑盒
內說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗操作，網(wǎng)站電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考。
3. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵
守本試劑盒的實(shí)驗說(shuō)明才會(huì )得到最佳的檢測結果。
4. 本公司只對試劑盒本身負責，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責，請使用者使用前充
分考慮到樣本的可能使用量，預留充足的樣本。
5. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會(huì )由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導致ELISA實(shí)驗
結果偏差。
6. 若樣本為細胞培養上清，因該類(lèi)樣本干擾因素較多，如：細胞狀態(tài)、細胞數量、采樣時(shí)間等，
所以可能存在檢測不出的情況。
7. 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及
捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。
人低氧誘導因子-1α ELISA 試劑盒
產(chǎn)品型號：M-EH110516
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