PRECICE® ADK Assay Kit——novocib

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NOVOCIB位于法國,公司基于核苷酸代謝檢測技術(shù),為生命科學(xué)科研用戶(hù)及食品質(zhì)量檢測研究、制藥企業(yè),提供的酶相關(guān)檢測試劑。公司擁有專(zhuān)門(mén)用于核苷酸代謝檢測、重組蛋白酶分析及酶檢測試劑研究的PRECICE®檢測分析平臺,實(shí)驗試劑及科研服務(wù)涉及分析領(lǐng)域。

人腺苷激酶的高通量測定

PRECICE ^® ADK 檢測試劑盒為 ADK 活性的體外測量和新型 ADK 抑制劑的藥物發(fā)現 提供了一種方便、高通量兼容且非放射性的檢測方法。用于藥物發(fā)現的新工具，該試劑盒允許 HTS 搜索新的 ADK 抑制劑。

原理：
腺苷激酶使用ATP作為磷酸供體。它將 ATP 的末端磷酸基團轉移到底物上，產(chǎn)生 ADP 作為副產(chǎn)物。該測定基于使用肌苷作為替代 ADK 底物和涉及高活性 IMPDH（肌苷一磷酸脫氫酶）的偶聯(lián)反應，用于直接測量由 ADK 形成的肌苷一磷酸 (IMP)。在肌苷和ATP存在下，ADK催化肌苷磷酸化形成IMP和ADP。然后在 NAD 存在下，IMP 立即被高活性 IMPDH 氧化為 XMP，從而形成 NADH ₂。

ADK在人體中的作用

腺苷激酶是一種普遍存在的酶，可調節腺苷 (AR) 的細胞內和細胞外濃度，腺苷是中樞神經(jīng)系統功能的重要調節劑，也是參與缺氧、炎癥和傷害感受的信號分子。與腺苷脫氨酶一起，腺苷激酶調節細胞內和細胞外的腺苷濃度。腺苷激酶的抑制導致局部腺苷濃度的選擇性增加和體內癲癇發(fā)作易感性和傷害感受的降低⁽³⁾。ADK 功能障礙涉及多種病理，包括糖尿病⁽¹³⁾、癲癇⁽⁶⁾和癌癥。因此，ADK 成為一種合理的治療靶點(diǎn)，腺苷調節藥物已被廣泛應用。測試⁽¹⁾作為新的鎮痛劑和抗炎劑⁽⁴⁾治療精神分裂癥⁽⁷⁾或限制缺血性中風(fēng)后的腦損傷⁽⁸⁾。

驗證

使用化合物 A-134974（一種已知的 ADK 抑制劑（Sigma-Aldrich，已獲得 Abbott Laboratories 的許可））驗證了使用PRECICE® ADK Screening Assay Kit篩選 ADK 抑制劑和 IC50 測量。Z'-Factor 由 44 個(gè)陰性（無(wú) ADK 抑制）和陽(yáng)性（用 500nM A-134974 抑制 ADK）計算得出，測量結果為 0.68，這是篩選試驗的出色性能水平

化合物 A-134974 在 12 種不同濃度下的 ADK 抑制曲線(xiàn)。
所有數據點(diǎn)代表 8 個(gè)孔的平均值 (+/-SD)（2 個(gè)孔 - 重復 - 在 4 個(gè)獨立的板上）。IC ₅₀通過(guò)用最小二乘法擬合數據的4參數非線(xiàn)性曲線(xiàn)來(lái)確定。進(jìn)行 IMPDH 活性測定以確認 IMPDH 不被化合物 A-134974 抑制（數據未顯示）。

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