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總RNA提取試劑

簡(jiǎn)要描述:總RNA提取試劑:RNApure(TRIzol)實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍廣泛

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 更新時(shí)間:2024-06-07
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詳細(xì)介紹

品牌其他品牌供貨周期一個(gè)月
應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合

RNApure(TRIzol)是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍廣泛,可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等 樣品中提取總RNA。樣品在RNApure中被充分裂解的同時(shí)能夠***限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會(huì)分成三層:上層無(wú)色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相, RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總 RNA完整性好,無(wú)蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如RT-PCR、 Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等。

自備試劑

氯仿(新開(kāi)封或提取 RNA 專用)、無(wú)水乙醇。 

操作步驟

1.各種材料的處理

1)植物組織:取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在 RNApure中迅速研磨,每 30-50 mg 組織加入 1ml RNApure,渦旋混勻。

注意:樣品體積一般不要超過(guò) RNApure 體積的 10%。

2)動(dòng)物組織:取新鮮或-70℃凍存的動(dòng)物組織盡量剪碎,每 30-50mg 組織加入 1mlRNApure,勻漿儀進(jìn)行勻漿處理?;蛟谝旱醒心ズ蠹尤?1ml RNApure 混勻。

注意:樣品體積一般不要超過(guò) RNApure 體積的 10%。

3)單層培養(yǎng)細(xì)胞:吸去培養(yǎng)液,可直接在培養(yǎng)板中加入適量 RNApure(每 10cm2面積需要 1ml RNApure),用取樣器反復(fù)吹打使細(xì)胞裂解。也可用胰蛋白酶處理后,將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至 Rnase-free 的離心管中,13000×g 離心 5 分鐘,收集細(xì)胞沉淀,仔細(xì)吸除所有上清,加入 1ml RNApure 混勻。

注意:a. 收集細(xì)胞數(shù)量不要超過(guò) 1×10?。

b. RNApure 加量根據(jù)培養(yǎng)板面積決定,不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果 RNApure 加量不足,可能導(dǎo)致提取的 RNA 中有 DNA 污染。

c. 收集細(xì)胞時(shí)一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈,否則會(huì)導(dǎo)致裂解不全,造成 RNA 的產(chǎn)量降低。

4)細(xì)胞懸液:離心收集細(xì)胞。每 5×10?-1×10?動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每 10?細(xì)菌細(xì)胞加入 1 ml RNApure。

注意:

a. 加入 RNApure 前不要洗滌細(xì)胞,以免 RNA 降解。

b. 一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞可能需要?jiǎng)驖{儀或液氮研磨處理。

5)血液處理:直接取新鮮的血液,加入 3 倍體積 RNApure(推薦 0.25ml 全血加入 0.75mlRNApure),充分振蕩混勻。

6)可選步驟:對(duì)于蛋白、脂肪、多糖或胞外物質(zhì)含量高的樣品,如肌肉組織、脂肪組織或植物的塊莖,可以在勻漿處理后 4℃,13,000×g 離心 10 分鐘以除去不溶物質(zhì),此時(shí)沉淀中含胞外物質(zhì)、多糖和高分子量的 DNA,而 RNA 存在于上清中。

2.樣品中加入 RNApure 后反復(fù)吹打幾次,使樣本充分裂解。室溫放置 5 分鐘,使蛋白核酸復(fù)合物*全分離。

3.以每 1ml RNApure 加入 200ul 氯仿的比例加入氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩 15 秒,室溫放置 2 分鐘。

4.4℃ 13,000×g 離心 10 分鐘,此時(shí)樣品分為三層:紅色有機(jī)相,中間層和上層無(wú)色水相,RNA 主要在上層水相中,將上層水相移到一個(gè)新的 Rnase-free 離心管(自備)中。

5.在得到的水相溶液中加入等體積異丙醇,顛倒混勻,室溫放置 10 分鐘。

6.4℃ 12,000×g 離心10分鐘,棄上清。

7.加入75%乙醇(用Rnase-free Water配制)洗滌沉淀。每使用1ml RNApure用1ml75%乙醇對(duì)沉淀進(jìn)行洗滌。

8.4℃ 12,000×g 離心3分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄RNA沉淀。

注意:剩余的少量液體可短暫離心,然后用槍頭吸出,注意不要吸棄沉淀。

9.室溫放置 2-3 分鐘,晾干。加入 30-100ul Rnase-free Water,充分溶解 RNA,得到的RNA 保存在-70℃,防止降解。

注意:沉淀不要過(guò)分干燥,以免難于溶解。

本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

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  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

總RNA提取試劑









































































































































































































































































































































































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