品牌 其他品牌 貨號 K003 供貨周期 現(xiàn)貨 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥
laebio:Human Topoisomerase I Drug Screen Kit 貨號:K003
描述: 該檢測試劑盒包含用于藥物篩選目的的I型拓?fù)洚悩?gòu)酶活性常規(guī)檢測的試劑。人拓?fù)洚悩?gòu)酶I (topoI)是喜樹堿和其他“拓?fù)洚悩?gòu)酶I毒物"的 細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo),其中一些是迄今為止鑒定的很有希望的抗癌藥物。Topo I藥物篩選試劑盒具有巨大的價值,因?yàn)樗鼘⒛軌蚝侠砗Y選新的抗癌化合物,有朝一日可能用于減輕被診斷患有癌癥的人的痛苦。包括DNA標(biāo)記以允許清楚地檢測酶。該檢測對拓?fù)洚悩?gòu)酶I具有特異性。強(qiáng)烈建議將活性人拓?fù)洚悩?gòu)酶I(目錄號P005)與該試劑盒一起使用。
應(yīng)用:
體外研究超螺旋對轉(zhuǎn)錄的影響。 體外研究染色質(zhì)重建。 確定自然發(fā)生的DNA的超螺旋程度。 檢測長度僅相差一個堿基對的突變質(zhì)粒。 通過解螺旋DNA以暴露限制性位點(diǎn)來增加抗性DNA底物的限制性內(nèi)切酶消化。 抗癌藥篩選。
質(zhì)量控制測試:
通過分析線性KDNA和線性質(zhì)粒DNA的形成來進(jìn)行核酸酶污染的測試。用KDNA或超螺旋pGEM 5Z DNA孵育(4 hrs. at 37 o C in the presence of 10 mM MgCl 2 )被執(zhí)行。在這些條件下不會產(chǎn)生線性DNA或分解產(chǎn)物。 Topo II交叉污染檢查為陰性。在topo II反應(yīng)條件下,KDNA不能脫去。 套件內(nèi)容:
超螺旋質(zhì)粒底物DNA對照(目錄號D001, 100微升
LAE1 DNA, 0.2微克/微升,適用于100次標(biāo)準(zhǔn)檢測)。 松弛的質(zhì)粒DNA標(biāo)記物(cat# D002,100 ul預(yù)松弛的pLAE1 DNA,由Topo I以0.04 ug/ul的濃度在凝膠加載緩沖液中制備,適用于20種標(biāo)準(zhǔn)分析)。 5X Topo I反應(yīng)緩沖液(目錄號B001,500微升,適用于100種標(biāo)準(zhǔn)檢測)。 Topo I停止緩沖液/凝膠加載染料(目錄號B002,500微升,適用于100種標(biāo)準(zhǔn)檢測)。 對照抑制劑(目錄# B003,喜樹堿;凍干)。 檢測條件:
建議在最終體積為10微升的Topo I反應(yīng)緩沖液(40 mM Tris-Cl,pH 7.5,100 mM NaCl或KCl,10mM MgCl)中使用5單位的Topo I活性物質(zhì)(目錄號P005)進(jìn)行松弛試驗(yàn) 2
、0.5 mM EDTA、30微克/毫升BSA)。 標(biāo)準(zhǔn)分析:超螺旋質(zhì)粒DNA(目錄號D001)以0.2微克/反應(yīng)使用。用5微升(在10微升反應(yīng)體積中)終止緩沖液(5% sarkosyl,0.0025%溴酚藍(lán),25%甘油)終止反應(yīng)。然后可以在0.8%天然瓊脂糖凝膠上分析反應(yīng)產(chǎn)物。 每個泳道加載5 ul (0.2 ug)松弛的質(zhì)粒DNA標(biāo)記(目錄號D002)作為對照。 運(yùn)輸/儲存: 該套件在環(huán)境溫度下運(yùn)輸,應(yīng)在-20℃下儲存 o C.
僅供研究使用。
一個單位的topo I與0.2微克pGEM 5Z DNA在37℃孵育30分鐘 o C.
上海牧榮生物科技有限公司
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laebio:Human Topoisomerase I Drug Screen Kit 貨號:K003