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OptiVitro® T細(xì)胞無血清培養(yǎng)基介紹

更新時間:2023-09-08      點擊次數(shù):754

OptiVitro® T細(xì)胞無血清培養(yǎng)基

? 無血清,無異種成分,無外源生長因子
? 支持T細(xì)胞的快速增殖和高密度培養(yǎng),可用于大規(guī)模工藝流程
? 提供瓶裝&袋裝兩種形式,便于生產(chǎn)規(guī)模擴(kuò)大和商業(yè)化開發(fā)
? 適合于多種激活方法,可支持較長周期的穩(wěn)定培養(yǎng)(>14天)
? 自主研發(fā),供貨穩(wěn)定,可提供定制化服務(wù)(配方優(yōu)化等)
? 按照GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)和管理, 完成FDA DMF備案

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應(yīng)用:適合用于擴(kuò)增人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中的 T 細(xì)胞,也適合于 T 細(xì)胞的重激活擴(kuò)增培養(yǎng)。應(yīng)用于T細(xì)胞療法開發(fā),如CAR-T、TCR-T、TIL等。

  • 常見問題

    1. 組分:
    本產(chǎn)品每1L基礎(chǔ)培養(yǎng)基配發(fā)8mL添加組分,添加組分不是ICSR或者血替,化學(xué)成分明確,可放心使用,必須配成全培養(yǎng)基后再使用;——可以提供成分說明及TSE/BSE的申明。
    2. T細(xì)胞激活方式:
    使用本產(chǎn)品,可根據(jù)說明書用抗體包板方式進(jìn)行激活,也可購買商業(yè)抗體偶聯(lián)磁珠進(jìn)行激活,本產(chǎn)品同樣支持磁珠激活。
    3. 活率:
    直接培養(yǎng)PBMC,D5后活率可達(dá)90%以上,從PBMC中分選出T細(xì)胞,則D3開始活率可達(dá)到90%以上,D7后活率均可達(dá)到95%以上;如果轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR,轉(zhuǎn)導(dǎo)當(dāng)天活率顯著下降,為正常現(xiàn)象,繼續(xù)培養(yǎng)活率會持續(xù)上升。
    4. 培養(yǎng)方式:
    使用本產(chǎn)品,比較推薦的培養(yǎng)方式是D0天激活,D3、D5、D7補(bǔ)充培養(yǎng)液將細(xì)胞密度調(diào)整到0.5-1x10^6cells/ml,D7后可選擇2天或3天補(bǔ)一次液。
    5. T細(xì)胞擴(kuò)增速度:
    T細(xì)胞的擴(kuò)增在D3-D9速度較快,基本平穩(wěn),D9細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)一般可以達(dá)到200倍以上。D9后細(xì)胞擴(kuò)增速度逐漸減緩,激活PBMC中的T細(xì)胞,最多可培養(yǎng)20天。
    6. 高密度培養(yǎng):
    靜置培養(yǎng),密度可達(dá)5-6x10^6 cells/ml,搖瓶培養(yǎng)或其他震蕩培養(yǎng)方式,密度可達(dá)10x10^6 cells/ml以上。
    7. CD4/CD8比例調(diào)節(jié):
    使用本產(chǎn)品并且用磁珠激活,CD4比例較高,用抗體包板激活則CD8比例較高,可以通過改變激活方式、改變抗體包板濃度,調(diào)節(jié)CD4/CD8比例。
    8. T細(xì)胞亞型分群:
    Tn為初始T細(xì)胞,Tcm為中央記憶型T細(xì)胞,Tem為激活的Tcm,Tef為效應(yīng)T細(xì)胞,分群比例隨著細(xì)胞培養(yǎng)的時間而變化。不同客戶對分群的要求可能不同,且不同激活方式、細(xì)胞因子的選擇以及濃度,對分群影響很大,建議客戶自行測試。
    9. T細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo):
    根據(jù)客戶反饋測試數(shù)據(jù),本產(chǎn)品陽性率可達(dá)到50%左右,但是不同客戶使用的工藝不同,可能導(dǎo)致陽性率有變化。CAR慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo),可使用polybrene輔助轉(zhuǎn)導(dǎo),逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可使用retronectin輔助轉(zhuǎn)導(dǎo),也有許多新型輔助因子可提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率;采用離心轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式可提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。
    10. T細(xì)胞生物反應(yīng)器培養(yǎng):
    靜置培養(yǎng)后D5-D7開始在反應(yīng)器中培養(yǎng),在達(dá)到目標(biāo)體積之前,可以2-3天補(bǔ)液細(xì)胞密度調(diào)整到0.5-1x10^6 cells/ml,到達(dá)目標(biāo)體積后可以采取部分灌流策略。



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